環保型GS試劑在特殊染色中的使用

環保型GS試劑在特殊染色中的使用

信芳杰  管靜靜  邵世宏  趙涵  計曉彬

青島大學附屬醫院

摘自：2014年《臨床與實驗病理學雜志》

現代病理學中免疫組化、細胞及分子生物學技術的應用日益廣泛，由于這些技術需要較高的實驗條件和昂貴的試劑而難以普及。特殊染色技術以其操作簡單、檢測快速和成本低廉等優勢，在臨床病理學診斷中仍具有重要的應用價值。病理實驗室的環保問題日益受到關注，甲醛、二甲苯嚴重影響環境和健康，尋求一種無刺激性氣味、******無害的替代品已成為病理工作者的迫切愿望。新型環保試劑在常規HE 染色中已有出色表現，本科室在特殊染色中使用新型保試劑也取得滿意效果，現介紹如下。

1. 材料與方法

1.1材料選取青島大學附屬醫院病理科2011年12月——2013年12月。各類手術及活檢組織標本，包括腎臟穿刺組織、皮膚、骨髓、肺、膀胱、胃、肝等，每份標本均常規取材2 份，分別進行傳統石蠟制片及染色、GS環保試劑制片及染色。

1.2試劑與儀器傳統石蠟制片及染色試劑包括10%中 ******爾馬林、梯度乙醇、二甲苯、石蠟；GS環保試劑包括固定液、脫水液、透明液、浸蠟液、除水透明液、GS蘇木精，均為哈爾濱格林公司產品。特殊染色試劑包括PAS染色、Masson 染色、六胺銀染色、PASM-Masson染色、抗酸染色、剛果紅染色、黏液卡紅染色、網狀纖維染色、彈力纖維染色等，由珠海 Baso公司提供。主要儀器有脫水機Leica ASP300，切片機 Leica 2235，全自動染色機Leica ST5020和封片機Leica CV5030。

1.3方法

1.3.1傳統石蠟制片常規取材后，經10%中******爾馬林固定，梯度乙醇脫水、二甲苯透明、浸蠟，石蠟包埋。

1.3.2傳統染色方法切片經二甲苯脫蠟、梯度乙醇脫水、流水沖洗，按照各種特殊染色的步驟進行染色、梯度乙醇脫水、二甲苯透明、中性樹膠封固。

        圖7動脈血管周圍組織切HE染色，甲醛色素沉積，影響切片清晰和美觀   

        圖8肺組織切片HE染色，染片后脫水不徹底，出現鏡下水印

        圖9腎臟組織切片HE染色，出現氣泡，既影響美觀，又妨礙閱片

1.3.3GS環保試劑制片采用雙置法脫水方案：GS無醛固定液分別為60、180 min；75%乙醇5 min、5%乙醇5 min；脫水液I分別為30、60 min；脫水液n分別為30、60 min；透 明液分別為30、60min；浸蠟液11匕浸蠟液11匕石蠟包埋。

1.3.4GS環保試劑染色脫蠟液I、n各5 min；梯度乙醇脫水、流水沖洗；按照各特殊染色的步驟進行染色；除水透明液2 min；透明液I、n各2 min；無苯膠封固。

2. 結果

2.1制片使用GS環保試劑制作的組織蠟塊，所做切片軟硬適中，連續性好，厚薄均勻，尤其皮膚、子宮肌瘤等硬韌組織處理后有較好的柔韌度；腎臟穿刺組織較傳統方法更易切出較薄切片；對脂肪組織處理徹底，能切出完整切片。

2.2染色石蠟切片經GS染色套液處理后，11種特殊染色結果穩定，組織結構清晰，著色部位準確，色澤艷麗分明 (圖1 -4)，且染色時間縮短，完全可以替代傳統染色試劑。

圖1腎小球************袢僵硬、基膜彌漫性增厚，外周袢分層、雙軌狀，內皮下、上皮側大量嗜復紅物沉積，PASM-Masson染色

圖2腎小球入球小動脈管壁及腎小管基膜透明樣變性，PAS染色

圖3甲狀腺髓樣癌內淀粉樣物質形成，剛果紅染色

圖4骨髓增生異常綜合征呈陽性，網狀纖維染色

3. 討論

目前，雖然分子生物學方法已滲透到各個領域，但許多傳統的病理學特殊染色方法仍然是顯示病原體、組織及細胞內特殊結構經濟、簡便且可靠的方法。在傳統制片染色中，甲醛為常規固定劑，二甲苯為******組織透明劑，但甲醛和二甲苯已經被******衛生組織確定為致癌和致畸形物質。格林GS新型環保試劑******、無醛、無刺激性氣味，環保脫水液和透明液滲透均勻、穩定，作用快速溫和，組織處理軟硬適中，不易導致組織過度收縮，出現組織過硬現象。本科室在日常工作中，GS環保套液與全自動脫水機、染色封片工作站配合使用，不僅更加安全環保，也有利于染色的質量控制。

本科室進行的十幾種特殊染色中，經格林GS新型環保試劑處理，糖原、淀粉樣物質、網狀纖維、含鐵血黃素、抗酸桿菌等均取得較好的固定效果，特殊染色結果色彩分明，對比清晰，能夠清楚顯示腎小球************基膜病變、腎間質小動脈的玻璃樣變性、骨髓穿刺組織中網狀纖維分布、甲狀腺髓樣癌中沉積的淀粉樣物質等，其染色效果與傳統制片染色方法相當，能夠很好應用于病理診斷。

綜上所述，格林GS組織標本制片及染色環保套液可以替代傳統的以甲醛和二甲苯為主體的制片流程，大大降低了日常工作中有毒氣體的濃度，不僅可以制作出可靠穩定的組織切片，還有效保證了技術人員和環境的健康安全。另外，GS環保試劑在骨髓穿刺石蠟切片5、免疫組化1、熒光定量 PCR 6等檢測中，均有穩定的表現，若能充分發揮其優勢，將大大改善病理技術的工作環境，帶來真正的綠色實驗室。

 

參考文獻

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